Free DNA Fetal Kit® RhD
Kit de génotypage foetal RhD à partir d'ADN foetal libre du sang maternel
(technique PCR Temps réel)
Ref. : 502080133
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| L’utilisation de ce dispositif pour la détermination non invasive du génotype fœtal Rhésus D est couverte par une licence ISIS Innovation Ltd (Oxford University). |
1. L’alloimmunisation anti-Rhésus D
L’alloimmunisation anti-Rhésus D (RhD) est responsable, en l’absence de traitement, d’anémies fœtales et néonatales sévères ainsi que d’ictères néonatals graves. Elle correspond, chez la femme RhD négatif, à la synthèse d’anticorps IgG anti-D en réponse au passage transplacentaire d’hématies fœtales RhD positif dans la circulation maternelle. Les anticorps maternels traversant le placenta vers la circulation fœtale provoquent en retour une hémolyse et une anémie chez le fœtus RhD positif.
L’alloimmunisation peut être prévenue par l’administration d’immunoglobulines anti-D.
La connaissance du Rh D fœtal est essentielle :
- chez les femmes RhD négatif non immunisées pour sélectionner celles qui devront bénéficier d’une immunoprophylaxie ciblée ou systématique,
- chez les femmes RhD négatif déjà immunisées pour identifier les fœtus à risque d’anémie (fœtus RhD positif) devant faire l’objet d’une surveillance particulière.
Ce kit permet de déterminer le génotype RHD fœtal sur du sang maternel prélevé lors du suivi prénatal des patientes RhD négatif sans nécessiter de prélèvement invasif.
2. Principe du test
Il a été démontré que le plasma d’une femme enceinte contient des concentrations d’ADN fœtal faibles mais croissantes avec l’age gestationnel. Cet ADN équivaut à quelques copies jusqu’à plusieurs centaines de copies de génome fœtal par ml de plasma. Chez les femmes enceintes RhD négatif qui ne possèdent pas le gène RHD dans leur génome, il est possible d’identifier ce gène dans l’ADN extrait de leur plasma par une technique d’amplification génique (Brevet Oxford University) si leur fœtus est RHD positif.
La présence du gène RHD fœtal dans l’ADN du plasma maternel est détectée par PCR en temps réel ciblée sur deux régions distinctes du gène RHD : les exons 7 et 10, afin de détecter très spécifiquement le plus grand nombre de variants du gène RHD. Les amplicons sont révélés grâce à des sondes d’hydrolyse spécifiques de chaque exon amplifié.
Des contrôles positif, négatif, blanc, et contrôles d’extraction seront réalisés en parallèle.
3. Composition du kit
| • Control RHD positif (+) | : 6 x 600µL (Bouchon rouge) |
| • Control RHD négatif (-) | : 6 x 600µL (Bouchon vert) |
| • Control [100X] Maize DNA (non prêt à l’emploi) | : 3 x 14 µL (Bouchon jaune) |
| • Exon IVR2 Maize primers sens/antisens + probe | : 3 x 38 µL (Bouchon vert) |
| • Exon 7 du gène RHD primers sens/antisens + probe | : 3 x 38 µL (Bouchon blanc) |
| • Exon 10 du gène RHD primers sens/antisens + probe | : 3 x 38 µL (Bouchon rouge) |
4. Eléments nécessaires non fournis
* Kit pour extraction d’ADN (et matériel et accessoires associés) :
"QIAamp® MinElute® Virus Vacuum Kit" 50 colonnes, QIAGEN Réf. 57714
ou
"QIAamp DSP Virus Kit" (IVD CE) 50 colonnes, QIAGEN Réf. 60704
* Réactifs PCR en temps réel :
- Pour LightCycler® : kit "LightCycler® Taqman® Master" Roche,
Réf. 04 535 286 001. (50 réactions), ou Réf. 04 735 536 001 (480 réactions).
- Autres appareils (ABI, MX) : kit "Faststart Taqman® ProbeMaster" Roche,
Réf. 04673409 (100 réactions).
* Consommables pour thermocycleur PCR en temps réel, avec système capillaires en verre de 20µl, ou avec plaque multi-puits.
* Pipettes et embouts spécifiques à filtre pour PCR.
5. Performances
Une étude portant sur 300 échantillons issus de plasmas collectés entre 12 et 36 semaines d’aménorrhée chez des femmes enceintes de phénotype RhD négatif a été effectuée
(C. Rouillac-Le Sciellour, V. Sérazin, Y. Brossard, O. Oudin, C. Le Van Kim, Y. Colin, Y. Guidicelli, M. Menu, J-P. Cartron, Noninvasive fetal genotyping from maternal plasma, use of a new developed Free DNA Fetal Kit® RhD. Transfusion Clinique et Biologique 2008 ; 14:572-7).
(lire l'article intégral).
Les résultats ont été comparés au génotype RHD fœtal déterminé sur liquide amniotique, ainsi qu’à la technique initialement développée à partir des travaux de C. Rouillac-Le Sciellour et col. au Centre National de Référence en Hémobiologie Périnatale.
Une corrélation de 100% a été obtenue entre les deux méthodes.
Aucun résultat faux négatif, défini par l’absence d’amplification des deux exons du gène RHD n’a été trouvé chez les enfants ayant un génotype RHD positif.